Чаще всего на ПЦР отправляют соскобы со слизистой половых путей, и этот анализ является самым точным из всех имеющихся на сегодняшний день средств диагностики ЗППП. Редко приходится делать ПЦР крови, мочи, слюны и других биологических жидкостей.

Техника исполнения анализа

Под действием определенных реактивов ДНК бактерий в материале, отправленном на анализ, увеличивается во много раз и становится различимой и идентифицируемой для приборов.

Значение результатов анализа

ПЦР всегда качественный анализ, то есть ответом может быть только “обнаружено” или “не обнаружено”. Расшифруем, что кроется за этими значениями. “Обнаружено”, или “положительно”, или просто “+” – из исследуемого материла выделена ДНК соответствующей бактерии, и с вероятностью 97% можно сказать, что человек заражен этой инфекцией. “Не обнаружено”, “отрицательно”, “-” – из исследуемого материала ДНК соответствующей бактерии не выделено, с вероятностью 97% можно утверждать, что большого количества этих бактерий в организме пациента нет, с вероятностью 60% – что пациент не заражен этой инфекцией.

Для того, чтобы бактерия попала в пробирку с материалом, отправляемым на анализ, необходимо, чтобы она содержалась в организме человека в определенном количестве. Если количество бактерий в организме человека минимально, они почти наверняка в пробирку не попадут, и результат анализа придет отрицательный. Однако человек при этом все равно инфицирован и болен. Поэтому для максимального увеличения точности результата перед проведением ПЦР-диагностики требуется специальная подготовка.

ВЫСОКАЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ И СПЕЦИФИЧНОСТЬ

ПЦР – метод молекулярной диагностики, ставший для ряда инфекций “золотым стандартом”, проверен временем и тщательно апробирован клинически.

Необычайная чувствительность метода позволяет нашим специалистам гарантированно обнаруживать единичные возбудители в биологическом материале на основе их генетической информации. Аналитическая чувствительность АмплиСенс ПЦР-тест-систем для большинства вирусов и бактерий – воспроизводимое выявление 100 микроорганизмов в исследуемой биологической пробе (1000 МИКРООРГАНИЗМОВ В 1 МЛ)

Специфичность ПЦР при использовании технологии АмплиСенс даже для всех вирусных, хламидийных, микоплазменных, уреаплазменных и большинства других бактериальных инфекций достигает 100%.

Забор биологического материала для лабораторных исследований методом ПЦР

Забор крови производится натощак из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8-1,1 мм) в одноразовый шприц объемом 5 мл или специальную вакуумную систему типа “Venoject” (с ЭДТА). При заборе в шприц кровь из него аккуратно (без образования пены) переносится в одноразовую пробирку с антикоагулянтом (6% раствор ЭДТА в соотношении 1:19 или 3,8% раствор цитрата Na в соотношении 1:9. Гепарин в качестве антикоагулянта использовать нельзя), пробирка закрывается пробкой и переворачивается несколько раз (для перемешивания с антикоагулянтом). Пробирка с кровью до исследования хранят в холодильнике при +4°С – +8°С.

Максимальный срок хранения:

При исследовании на вирусные гепатиты – 2 суток

При исследовании на другие инфекции – 5 часов

Для анализа отбирается первая порция утренней мочи в количестве 10 мл в специальный флакон или пробирку без консервирующего раствора.

Максимальный срок хранения отобранного материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С.

Перед забором слюна производится трехкратное полоскание полости рта физиологическим раствором. Забор слюны производится в одноразовые пробирки в количестве 3-5 мл.

Материал необходимо отбирать непосредственно перед исследованием или немедленно доставлять в лабораторию. При невозможности быстрой доставки материал замораживают при –20 °С. Последующая транспортировка осуществляется в замороженном состоянии (в термосе со льдом).

Мазок из ротоглотки

Забор материала производится рабочей частью стерильного одноразового аппликатора с задней стенки глотки и крипт миндалин. После забора материала аппикатор помещают в стерильную одноразовую пробирку.

Мокрота и плевральный выпот

Материал отбирают в специальные флаконы в количестве 5-10 мл.

Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С – +8°С.

Биопсийный материал

Биопсийный материал помещают сухую одноразовую пробирку типа “Эппендорф”.

Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С – +8°С.

Синовиальная жидкость

Забор материала производится одноразовым шприцом в количестве 1 мл. Отобранный материал помещают в сухую одноразовую пробирку типа “Эппендорф”.

Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С – +8°С.

Забор материала для анализа на урогенитальные инфекции

Забор материала у женщин:

Соскоб производится из трех различных точек:

цервикальный канал

задний свод влагалища

При необходимости материал для исследования берется из генитальных язв (исследование на HSV-II, Haemophilus ducrei).

Забор производится универсальным зондом или ложкой Фолькмана. Если соскоб взят универсальным зондом, рабочая часть зонда, содержащая исследуемый материал, отрезается или обламывается и помещается в одноразовую пробирку типа “Эппендорф” с консервирующим раствором. Если забор производится ложкой Фолькмана, рабочая часть инструмента споласкивается в консервирующем растворе, содержащемся в одноразовой пробирке типа “Эппендорф”.

Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С – +8°С.

Забор материала у мужчин:

Соскоб (мазок).

Забор материала производится универсальным зондом из уретры. При необходимости материал для исследования берется из генитальных язв (исследование на HSV-II, Haemophilus ducrei).

Рабочая часть зонда, содержащая исследуемый материал, отрезается или обламывается и помещается в одноразовую пробирку типа “Эппендорф” с консервирующим раствором.

Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С – +8°С.

Сок предстательной железы:

После окончания массажа предстательной железы сок в количестве 0,5-1 мл собирают в одноразовую сухую пробирку типа “Эппендорф”. При невозможности получить сок, сразу после массажа собирают первую порцию мочи (в которой содержится сок предстательной железы) в количестве 10 мл (правила забора мочи смотрите выше).

Максимальный срок хранения 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С – +8°С.

Забор и хранение биологического материала (кровь) для исследований методом ИФА (инфекции)

Забор крови производится натощак из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8-1,1 мм) в одноразовый шприц объемом 5 мл или специальную вакуумную систему типа “Venoject” (с ЭДТА или без). При заборе в шприц кровь из него аккуратно (без образования пены) переносится в одноразовую “сухую” пробирку или в пробирку с антикоагулянтом (6% раствор ЭДТА в соотношении 1:19 или 3,8% раствор цитрата Na в соотношении 1:9).

Максимальный срок хранения сыворотки при температуре +4°С – +8°С – 48 часов

Максимальный срок хранения сыворотки при температуре -20°С – длительное хранение.

Забор и хранение биологического материала (кровь) для исследований на сифилис (Syphilis RPR, Syphilis TPHA, Syphilis TPHA (полуколичественный анализ), определения в сыворотке концетрации гормонов, онкомаркёров, аутоантител методом ИФА и для биохимических исследований

Забор крови производится:

Утром натощак (при динамическом наблюдении – всегда в одни и те же часы);

Только в “сухую” пробирку или специальную коммерческую вакуумную систему без антикоагулянта.

Забор крови производится натощак из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8-1,1 мм) в сухую пробирку объемом 5 мл или специальную вакуумную систему типа “Venoject” (без антикоагулянта). Забор шприцом нежелателен в связи с опасностью возникновения гемолиза.

Кровь должна быть доставлена в лабораторию в день забора. Пробирку с кровью до исследования хранят в холодильнике при +4°С – +8°С.

Максимальный срок хранения сыворотки при температуре +4°С – +8°С – 48 часов.

Максимальный срок хранения сыворотки при температуре -20 °С – длительное хранение.

Допускается только однократная разморозка сыворотки.

Забор крови для определения субпопуляций и функциональной активности лимфоцитов и нейтрофилов

Забор крови производится:

Утром натощак (5 мл крови).

Для предотвращения свёртывания в кровь при взятии добавляют антикоагулянт: 20 единиц гепарина на 1 мл крови. Лучше использовать стандартные пробирки с гепарином (ВАКУТАЙНЕР на-гепарин или ли-гепарин на 5-7 мл с зелёными крышками фирмы Becton Dickinson).

Перед взятием крови равномерно распределить гепарин по стенкам пробирки.

При взятии шприцем, во избежании гемолиза, кровь в пробирку спускать плавно, без напора.

После взятия пробирку с образцом несколько раз перевернуть. Не встряхивать и не крутить на шейкере.

Кровь должна храниться не более 48 часов при комнатной температуре

При перевозке температура крови должна быть +18 °С – +24 °С

Для определения иммуноглобулинов и ЦИК в сыворотке крови,

забор крови производится только в сухую пробирку!!!

Условия забора и перевозки те же.

Забор и хранение биологического материала (кровь) для определения группы крови по системе AB0 и Резус-фактора

Забор крови производится натощак из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8-1,1 мм) в одноразовый шприц объемом 5 мл или специальную вакуумную систему типа “Venoject” (с ЭДТА). При заборе в шприц кровь из него аккуратно (без образования пены) переносится в одноразовую пробирку с антикоагулянтом (6% раствор ЭДТА в соотношении 1:19 или 3,8% раствор цитрата Na в соотношении 1:9).

Кровь должна быть доставлена в лабораторию в день забора. Пробирку с кровью до исследования хранят в холодильнике при +4°С – +8°С.

Забор и хранение биологического материала (моча) для определения суточной экскреции 17-КС

Утренняя моча сбрасывается, следующие порции мочи, включая утреннюю порцию следующего дня, собираются в отдельную посуду. Объём собранной мочи перемешивается, измеряется(!). В баночку отливается 50 мл мочи.

Доставка образца с указанием диуреза – в те же сутки.

При более длительном хранении (более суток) требуется заморозка.

Забор исследуемого материала для бактериологических исследований

ОТДЕЛЯЕМОЕ УРОГЕНИТАЛЬНОГО ТРАКТА.

Правила подготовки больного к исследованию и забора материала:

Материал для исследования у женщин следует брать перед менструацией или через 1-2 дня после ее окончания. Рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 3-4 часов и половых сношений перед взятием материала.

Женщины в день явки на обследование не должны спринцеваться и проводить туалет наружных половых органов.

Исследуемый материал берут специальными одноразовыми зондами, ложкой Фолькмана, бактериологической петлей либо ушным зондом с затупленным концом.

За 5-7 дней до забора материала необходимо прекратить прием химиопрепаратов и лечебные процедуры.

Исследуемый материал должен быть без примесей крови.

При вялотекущих и хронических инфекциях урогенитального тракта рекомендуется применять один из следующих методов провокации:

биологическая: введение гоновакцины (500 млн. микробных тел) взрослым однократно, внутримышечно, детям старше 3-х лет- 100-200 млн. микробных тел. Детям до 3 лет не рекомендуется введение гоновакцины;

термическая: применение в течение 3-х дней диатермии с абдоминально-вагинально-сакральным расположением электродов по 30,40,50 мин или индуктотермии по 10,15,20 мин. Следует производить забор отделяемого из уретры, цервикального канала и прямой кишки через один час после каждого прогревания;

механическая: наложение металлического колпачка на шейку матки женщин на 4 часа, проведение массажа уретры мужчин на буже в течение 10 мин;

алиментарная: употребление соленой, острой пищи и алкоголя за 24 часа до исследования.

Не следует проводить химические провокации, так как они губительно действуют на некоторых возбудителей.

Забор материала производят после провокации и через 24-48-72 ч.

Взятие материала проводит врач акушер-гинеколог при подозрении на инфекционную природу патологического процесса.

Содержимое цервикального канала, полости и придатков матки в норме стерильно.

УРЕТРА

Перед взятием материала наружное отверстие уретры необходимо обработать тампоном, смоченным стерильным физиологическим раствором.

При наличии гнойных выделений соскоб надо брать либо сразу, либо через 15-20 мин после мочеиспускания, при отсутствии выделений следует провести массаж уретры с помощью зонда для взятия материала.

У женщин перед введением зонда в уретру необходимо провести ее массаж о лобковое сочленение.

В уретру женщин зонд ввести на глубину 1-1,5см, мужчин – на 3-4см и сделать несколько вращательных движений. У детей материал берут только с наружного отверстия уретры.

ВУЛЬВА, ПРЕДДВЕРИЕ ВЛАГАЛИЩА. Отделяемое берут стерильным ватным тампоном. При воспалении бартолиниевых желез производят их пункцию, при вскрытии абсцесса железы содержимое берут стерильным ватным тампоном.

ВЛАГАЛИЩЕ. Материал для исследования берут стерильным тампоном из заднего свода или с патологически измененных участков слизистой. Материал для посева должен быть взят до проведения мануального исследования.

ЦЕРВИКАЛЬНЫЙ КАНАЛ.

Перед взятием материала необходимо удаление ватным тампоном слизи и обработка шейки матки стерильным физиологическим раствором

Необходимо пользоваться кольпоскопом.

Зонд ввести в цервикальный канал на глубину 0,5-1,5 см.

При наличии эрозий цервикального канала необходимо их обработать стерильным физиологическим раствором, и материал следует брать с границы здоровой и измененной ткани.

При извлечении зонда необходимо полностью исключить его касание стенок влагалища.

Для посева может быть использован соскоб слизистой, полученный при диагностическом выскабливании стенок цервикального канала.

МАТКА Материал берется с помощью специальных инструментов типа шприца-аспиратора, имеющего на зонде покрытие.

ПРИДАТКИ МАТКИ

При воспалительном процессе в придатках матки материал из очага инфекции (гной, экссудат, кусочки органов) берется либо при оперативном вмешательстве, либо при проведении диагностической пункции в малом тазу, проводимой через влагалищные своды.

Взятый для исследования материал в транспортной среде может сохраняться до 24 часов при +4° С. Не допускается замораживание пробы.

МОЧА

Микробиологическое исследование мочи нужно проводить до начала антибактериальной терапии. Моча здорового человека стерильна.

Утром после тщательного туалета наружных половых органов в стерильную посуду собирают среднюю порцию свободно выпущенной мочи в количестве 3-5 мл. При подозрении на простатит получают 4 пробы: 3 порции мочи (первая и средняя порции при самопроизвольном мочеиспускании и последнюю через 5-10 минут после массажа предстательной железы) и секрет предстательной железы при массаже.

Взятие мочи с помощью катетера связано с риском инфицирования мочевыводящих путей, поэтому его желательно избегать. Катетеризацию производят в случаях, когда больной не способен мочиться или для разграничения воспалительного процесса в почках и мочевом пузыре. С этой целью мочевой пузырь опорожняют и вводят в него 50мл раствора, содержащего 40 мг неомицина и 20 мг полимиксина. Через 10 минут берут пробы мочи для исследования. При локализации процесса в мочевом пузыре моча остается стерильной. При инфицировании почек отмечается бактериурия.

Мочу больного можно получить путем надлобковой пункции мочевого пузыря. Этот метод взятия мочи дает наиболее достоверные результаты.

Микробиологическое исследование мочи надо проводить как можно быстрее после ее получения от больного, т.к. микробы, содержащие в моче, быстро размножаются при комнатной температуре, что может дать ложные результаты при определении степени бактериальной обсемененности. В связи с этим при исследовании мочи на степень бактериурии, от момента взятия пробы мочи до начала исследования в лаборатории должно проходить не более 1-2 часов.

При исследовании мочи на наличие возбудителей урогенитальных инфекций проба может сохраняться до 18 часов при +4° С.

При транспортировке проб мочи необходимо учитывать температуру внешней среды.

КИШЕЧНЫЙ ДИСБАКТЕРИОЗ

Материал (испражнение) на кишечный дисбактериоз забирается до начала лечения антибактериальными и химиотерапевтическими препаратами.


Правила взятия, хранения и транспортировки биоматериала

Для выявления возбудителей заболеваний методом ПЦР

1.1.1. Взятие биоматериала производится из предполагаемого места обитания микроорганизмов и развития инфекции.

1.1.2. Количество забранного материала должно быть небольшим. Избыток отделяемого, слизь и гной отрицательно влияют на качество выделения ДНК и способствуют деградации ДНК при хранении и транспортировке.

1.1.3. При внесении биоматериала, взятого у пациента зондом с ватным тампоном или щеточкой, в пробирку типа эппендорф с буферным раствором, необходимо:

Соблюдать стерильность;

Прежде, чем погружать собранный на тампоне (щеточке) биоматериал в раствор, размазать его по сухой стенке пробирки, затем смочить тампон (щеточку) в растворе и, вращая зонд, тщательно смыть весь материал со стенки пробирки и тампона (щеточки);

По возможности отжать тампон о стенку пробирки, удалить зонд с тампоном (щеточкой) и закрыть пробирку.

Способы взятия биоматериала для исследований методом ПЦР

1.2.1. Соскобы. Для соскобов используются одноразовые стерильные зонды, имеющие ватный тампон с повышенной адсорбцией или «щеточки», реже - ложки Фолькмана, малые ушные ложки или аналогичные инструменты со слегка затупленными краями. Поскабливающими движениями собрать материал. Исследуемый материал должен содержать возможно большее количество эпителиальных клеток и минимальное количество слизи, примесей крови и экссудата. Внести материал в стерильную пробирку типа эппендорф с буферным раствором (см. раздел 1.1.).

Соскоб из цервикального канала: перед взятием соскоба необходимо удалить избыток слизи стерильным ватным тампоном, обработать шейку матки стерильным физиологическим раствором. Зонд ввести в цервикальный канал на глубину 0,5-1,5 см, избегая соприкосновения со стенками влагалища, и поскабливающим движением (не до крови) собрать материал. Небольшое количество эритроцитов в пробе не влияет на результат анализа. При наличии эрозии шейки матки материал берут с границы здоровой и измененной ткани.

Соскоб из уретры: зонд ввести в уретру (у мужчин - на глубину 2-4 см) и несколькими вращательными движениямисобрать материал. Накануне перед взятием материала допускается провокация (острая пища, алкоголь и др.). Рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 1-2-х часов перед взятием пробы. При наличии обильных гнойных выделений соскоб надо брать не позже, чем через 15 минут после мочеиспускания.

Соскоб с конъюнктивы берут, предварительно проведя анестезию глаза 0,5% раствором дикаина. Вывернув веко, зондом с ватным тампоном (либо глазным скальпелем) собрать эпителиальные клетки с конъюнктивы.

Соскоб из прямой кишки: зонд ввести в анальное отверстие на глубину 3-4 см и вращательным движением собрать материал.

1.2.2. Мазки. Одноразовым стерильным зондом с ватным тампоном или щеточкой взять небольшое количество отделяемого (со сводов влагалища, из зева, носоглотки и др.) и перенести в стерильную пробирку типа эппендорф с буферным раствором (см. раздел 1.1.).

1.2.3. Кровь. Для исследований методом ПЦР кровь должна быть нативной (не свернувшейся).

Кровь собрать асептически, путем венопункции - в фирменную пробирку (2-3 мл) с антикоагулянтом ЭДТА (гепарин в качестве антикоагулянта использовать нельзя! ), аккуратно перемешать, плавно переворачивая пробирку.

Кровь с ЭДТА является биоматериалом для следующих групп исследований:

- генетические исследования (момент забора крови значения не имеет).

- выявление возбудителей инфекций (наиболее информативными являются пробы, взятые при ознобе, повышенной температуре, т. е. предположительно во время виремии или бактериемии).

1.2.4. Моча. В пустой стерильный контейнер с плотно завинчивающейся крышкой собирают утреннюю первую или среднюю порцию мочи в количестве минимум 10 мл. Если забор мочи проводят днем, то перед этим пациент не должен мочиться 1,5-3 часа.

1.2.5. Мокрота. Утром провести санацию ротовой полости и горла (прополоскать раствором питьевой соды). Собрать мокроту в пустой стерильный широкогорлый флакон.

1.2.6. Биоптат. Взятие материала осуществлять из зоны предполагаемого местонахождения возбудителя инфекции, из поврежденной ткани или пограничного с повреждением участка. Поместить биоптат в стерильную пробирку типа эппендорф с буферным раствором.

1.2.7. Слюна, желудочный сок, ликвор, синовиальная жидкость. Слюна (1-5 мл), желудочный сок (1-5 мл), ликвор (1-1,5 мл) - поместить в пустую стерильную пробирку (контейнер).

1.2.8. Сок предстательной железы. После массажа предстательной железы сок собирают в количестве 0,5-1 мл в пустую стерильную пробирку (контейнер). При невозможности получить сок, сразу после массажа собирают первую порцию мочи в количестве не более 10 мл (в этой порции содержится сок предстательной железы).

1.2.9. Смывы, бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ). Стерильным ватным тампоном и 5-7 мл физиологического раствора проводят смыв, например, с наконечника эндоскопа или бронхоскопа, и помещают 0,5-5 мл смыва в пустую стерильную пробирку (контейнер).

1.2.10. Фекалии. Зонд с ватным тампоном помещают внутрь каловых масс и слегка проворачивают, захватывая небольшое количество материала. Затем материал помещают в стерильную пробирку типа эппендорф с буферным раствором.

Правила забора крови на определение мутаций в генах человека ПЦР диагностику

Кровь на ПЦР диагностику . Забор крови производится натощак из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8-1,1 мм) в одноразовый шприц объемом 2-5 мл и переносится в пробирку с ЭДТА или специальную вакуумную систему типа “Veccuette” (с ЭДТА с сиреневой крышкой), пробирка закрывается пробкой и переворачивается несколько раз (для перемешивания с антикоагулянтом).

Пробирка с кровью до исследования хранят в холодильнике при +4°С — +8°С. Максимальный срок хранения: Кровь, собранная в пробирку с ЭДТА, для определения мутаций в генах BRCA1/2, может храниться при +4°С — +8°С 2 дня.

Правила забора крови на определение ПЦР – исследований инфекций

Для получения плазмы забор крови производят натощак или через 3 часа после приема пищи из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8-1, 1 мм) в специальную вакуумную систему (сиреневые крышки – 6% ЭДТА). Пробирку закрывают крышкой и аккуратно переворачивают несколько раз вверх дном, чтобы кровь в пробирке тщательно перемешалась с антикоагулянтом (в противном случае кровь свернется, и выделение ДНК/РНК станет невозможным).

Гепарин в качестве антикоагулянта использовать нельзя!

Условия хранения и перевозки материала и предварительно обработанных проб

Образцы цельной крови: -при температуре 20-25ºС – в течение 2 часов; -при температуре 2-8ºС – в течение 6 часов с момента взятия материала для количественного определения нуклеиновых кислот; в течение 12 ч – для качественного определения нуклеиновых кислот;

Недопустимо замораживание образцов цельной крови!

Забор материала на ПЦР ВПЧ инфекций

Для исследования на ВПЧ необходимо достаточное количество эпителиальных клеток, т.к. вирус является внутриклеточным агентом. Допустимо умеренное присутствие примесей в виде цервикальной слизи и крови. В ряде случаев возможно взятие материала с помощью универсального гинекологического зонда, однако при этом объем соскобного отделяемого будет меньше, а количество клеток может быть недостаточным.

Удаляют слизь и отделяемое влагалища с поверхности шейки матки стерильным марлевым тампоном, вводят рабочую часть цитощетки в цервикальный канал и делают два-три полных оборота по часовой стрелке. Извлекают цитощетку и помещают ее рабочую часть, содержащую взятый материал, в пробирку с транспортной средой. Рабочую часть цитощетки обламывают не более 1 см пластиковой основы цитощетки и оставляют в пробирке с транспортной средой.

В случае невозможности обломить рабочую часть цитощетки или универсального зонда, следует максимально полно смыть клинический материал с их рабочей части в пробирку с транспортной средой, прижав ее к внутренней стороне пробирки и вращая по 5-10 раз по часовой и против часовой стрелки.

Недопустимо использование многоразовых ножниц для обрезания рабочей части цитощетки или универсального зонда – это может привести к перекрестной контаминации клиническим материалом и, как следствие, получению ложно-положительных результатов.

Пробирки с биологическим материалом до исследования хранят в морозилке при -16°С.

Забор материала на ПЦР диагностику у мужчин

Соскоб (мазок). Забор материала производится универсальным зондом из уретры. При необходимости материал для исследования берется из генитальных язв (исследование на HSV-II). Рабочая часть зонда, содержащая исследуемый материал, отрезается или обламывается и помещается в одноразовую пробирку типа “Эппендорф” с консервирующим раствором либо тщательно перемешивается вращательным движением, остатки жидкости на зонде отжать о стенки пробирки, зонд извлечь (выбросить в контейнер с дезинфицирующим раствором).

Пробирки с биологическим материалом до исследования хранят в морозилке при -18°С.

Сперма. Собирают в одноразовую сухую пробирку типа «Эппендорф». Максимальный срок хранения 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С — +8°С; при -18°С — -20°С не более 2-х недель.

Сок предстательной железы . После окончания массажа предстательной железы сок в количестве 0,5-1 мл собирают в одноразовую сухую пробирку типа “Эппендорф”. При невозможности получить сок, сразу после массажа собирают первую порцию мочи (в которой содержится сок предстательной железы) в количестве 10 мл.

Максимальный срок хранения 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С — +8°С; при -18°С — -20°С не более 2-х недель.

УРОГЕНИТАЛЬНЫЙ ХЛАМИДИОЗ

Материал для исследования Соскоб из уретры или цервикального канала, секрет предстательной железы, осадок мочи. У новорожденных в качестве материала для исследования используют соскоб с конъюктивы глаз и задней стенки глотки. У девочек в качестве материала для исследования используют соскоб из вульвы, у мальчиков - мочу.

Подготовка пациента, взятие биологического материала и условия его транспортировки За 10 дней до взятия материала на исследование необходимо прекратить прием химиопрепаратов и лечебные процедуры.

Особенности взятия материала из уретры

  • перед взятием материала пациенту рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 1,5-2 часов;
  • непосредственно перед взятием материала наружное отверстие уретры необходимо обработать тампоном, смоченным стерильным физиологическим раствором;
  • при наличии гнойных выделений соскоб рекомендуется брать через 15-20 мин после мочеиспускания, при отсутствии выделений необходимо провести массаж уретры с помощью зонда для взятия материала;
  • у женщин перед введением зонда в уретру проводится ее массаж о лобковое сочленение;
  • в уретру у женщин зонд вводится на глубину 1,0-1,5 см, у мужчин - на 3-4 см и затем делается несколько вращательных движений; у детей материал для исследования берут только с наружного отверстия уретры;

Особенности взятия материала из цервикального канала

  • перед взятием материала необходимо удалить ватным тампоном слизь и затем обработать шейку матки стерильным физиологическим раствором;
  • зонд вводится в цервикальный канал на глубину 0,5-1,5 см;
  • при наличии эрозий цервикального канала необходимо их обработать стерильным физиологическим раствором, и материал следует брать на границе здоровой и измененной ткани;
  • при извлечении зонда необходимо полностью исключить его касание со стенками влагалища;

После взятия материала зонд опускается в пробирку с транспортной средой “ДНК-ЭКСПРЕСС”. После внесения зонда в транспортную среду он несколоко раз ротируется, а затем удаляется из пробирки. Про-бирка закрывается и маркируется. Если время транспортировки биологического материала с момента взя-тия до момента его доставки в лабораторию более 2-х часов, то пробирку необходимо заморозить при -20 0 С. Транспортировка биологического материала должна производиться только в сумке-холодильнике. В замороженном виде биологический материал может храниться не более 2-х недель.

Особенности взятия секрета предстательной железы

Перед взятием секрета простаты головка полового члена обрабатывается стерильным ватным тампоном, смоченным физиологическим раствором. Секрет простаты берется после предварительного массажа простаты через прямую кишку. Врач проводит массаж с надавливанием несколькими энергичными движениями от основания к верхушке. Затем из кавернозной части выдавливается простатитческий секрет. Транспортировка биологического материала должна производиться только в сумке-холодильнике.

Особенности взятия (сбора) мочи

Мочу собирают утром натощак после сна или не ранее чем через 2-3 часа после последнего мочеиспускания. Утренняя моча отстаивается в течение 1 часа, затем осторожно сливается, оставляя только придонную часть - около 10 мл. Этот остаток сливают в центрифужную пробирку и центрифугируют. Затем надосадочную жидкость вновь сливают, а осадок (без жидкости) зондом переносят в пробирку для ПЦР.

До получения осадка мочу нельзя охлаждать или замораживать.

Особенности взятия материала с задней стенки глотки

Одноразовый зонд вводят за мягкое небо в носоглотку и проводят по задней стенке глотки. После взятия материала зонд опускается в пробирку с транспортной средой “ДНК-ЭКСПРЕСС”. После внесения зонда в транспортную среду он несколоко раз ротируется, а затем удаляется из пробирки. Пробирка закрывается и маркируется. Если время транспортировки биологического материала с момента взятия до момента его доставки в лабораторию более 2-х часов, то пробирку необходимо заморозить при -200С. Транспортировка биологического материала должна производиться только в сумке-холодильнике. В замороженном виде биологический материал может храниться не более 2-х недель.

Особенности взятия материала с конъюктивы глаз

При наличии обильного гнойного отделяемого его убирают стерильным ватным тампоном, смоченным физиологическим раствором. Соскоб берут с внутренней поверхности нижнего века движением к внутреннему углу глазной щели. При взятии соскоба необходимо придерживать веко руками, чтобы при моргании ресницы не касались зонда.

После взятия материала зонд опускается в пробирку с транспортной средой “ДНК-ЭКСПРЕСС”. После внесения зонда в транспортную среду он несколоко раз ротируется, а затем удаляется из пробирки. Пробирка плотно закрывается. Если время транспортировки биологического материала с момента взятия до момента его доставки в лабораторию более 2-х часов, то пробирку необходимо заморозить при -200С. Транспортировка биологического материала должна производиться только в сумке-холодильнике. В замороженном виде биологический материал может храниться не более 2-х недель.

УРОГЕНИТАЛЬНЫЙ МИКОПЛАЗМОЗ

Материал для исследования Отделяемое уретры, влагалища, цервикального канала, моча (центрифугат утренней первой и средней порций), секрет простаты, сперма.

Особенности взятия материала из влагалища

Материал должен быть взят до проведения мануального исследования. Зеркало перед манипуляцией можно смочить горячей водой, применение антисептиков для обработки зеркала противопоказано. Влагалищное отделяемое собирают стерильным одноразовым зондом из заднего нижнего свода или с патологически измененных участков слизистой и помещают в пробирку с транспортной средой “ДНК-ЭКСТПЕСС”. У девочек взятие материала производят со слизистой оболочки преддверия влагалища, а в отдельных случаях - из заднего свода влагалища через гименальные кольца. После внесения зонда в транспортную среду он несколоко раз ротируется, а затем удаляется из пробирки. Пробирка закрывается и маркируется. Если время транспортировки биологического материала с момента взятия до момента его доставки в лабораторию более 2-х часов, то пробирку необходимо заморозить при -200С. Транспортировка биологического материала должна производиться только в сумке-холодильнике. В замороженном виде биологический материал может храниться не более 2-х недель.

ГОНОРЕЯ

Материал для исследования Отделяемое уретры, цервикального канала, секрет предстательной железы, осадок мочи.

Подготовка пациента, взятие биологического материала и условия его транспортировки См. урогенитальный хламидиоз.

За 10 дней до взятия материала на исследование необходимо прекратить прием химиопрепаратов и лечебные процедуры. Материал для исследования у женщин следует брать перед менструацией или через 1-2 дня после ее окончания. Перед взятием материала необходимо воздержаться от мочеиспускания в течение 3-4 часов и половых сношений. Женщины накануне обследования не должны проводить туалет наружных половых органов и спринцевание. Исследуемый материал должен быть без примесей крови. Не следует для исследования брать свободно стекающие уретральные выделения. Секрет простаты следует брать только после окончания острых явлений простатита. При вялотекущей и хронической гонорее перед исследованием необходимо провести провокацию.

Методы провокации при гонорее:

  • биологическая: введение гоновакцины (500 млн. микробных тел) взрослым однократно, внутримышечно, детям старше 3-х лет - 100-200 млн. микробных тел; детям до 3-х лет введение гоновакцины не рекомендовано;
  • термическая: применение в течение 3-х дней диатермии с абдоминально-вагинально-сакральным расположением электродов по 30, 40, 50 мин или индуктотермии по 10, 15, 20 мин; взятие материала лучше всего провводить из уретры, цервикального канала через 1 час после каждого прогревания;
  • механическая: наложение металлического колпачка на шейку матки женщин на 4 часа, проведение массажа уретры у мужчин на буже в течение 10 мин;
  • алиментарная: употребление соленой, острой пищи и алкоголя за 24 часа до исследования.

Взятие материала производится после провокации и через 24-48-72 часа.

Для получения наиболее достоверных результатов необходимо проведение повторных исследований.

ТРИХОМОНИАЗ

Материал для исследования Отделяемое из уретры (у мужчин), влагалища, секрет простаты.

Подготовка пациента, взятие биологического материала и условия его транспортировки См. урогенитальный хламидиоз, урогенитальный микоплазмоз.

ТУБЕРКУЛЕЗ (внелегочные локализации)

Материал для исследования Моча, мазки из цервикального канала, уретры.

Подготовка пациента, взятие биологического материала и условия его транспортировки За 10 дней до взятия материала на исследование необходимо прекратить прием химиопрепаратов и лечебные процедуры. См. урогенитальный хламидиоз.

ЗАБОЛЕВАНИЯ ОРГАНОВ ДЫХАНИЯ АССОЦИИРОВАННЫЕ С Mycoplasma pneumoniae

Материал для исследования Мазок из носоглотки.

Особенности взятия мазка из носоглотки Взятие мазка проводится натощак или не ранее, чем через 2-4 часа после еды. При взятии материала необходимо хорошее освещение, пациент сидит против источника света, корень языка придавливают шпателем, материал берут стерильным зондом, не касаясь языка, слизистой щек и зубов и опускают в пробирку с транспортной средой “ДНК-ЭКСПРЕСС”. После взятия материала зонд опускается в пробирку с транспортной средой “ДНК-ЭКСПРЕСС”. После внесения зонда в транспортную среду он несколько раз ротируется, а затем удаляется из пробирки. Пробирка закрывается. Если время транспортировки биологического материала с момента взятия до момента его доставки в лабораторию более 2-х часов, то пробирку необходимо заморозить при -200С. Транспортировка биологического материала должна производиться только в сумке-холодильнике. В замороженном виде биологический материал может храниться не более 2-х недель.

ГАСТРОДУОДЕНАЛЬНЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ (гастрит, язвенная болезнь желудка или двенадцатиперстной кишки), АССОЦИИРОВАННЫЕ С Helicobacter pylori

Материал для исследования Биоптаты антрального отдела желудка, биоптаты двенадцатиперстной кишки, биоптаты десен, мазки из зубодесневого кармана.

Особенности взятия биопсийного материала

Взятие биопсийного материала проводится во время эндоскопического исследования. Перед началом противохеликобактерной терапии биопсийный образец берется из антрального отдела желудка. При контроле лечения взятие биопсийного образца проводится не ранее чем через 4 недели после проведения противохеликобактерной терапии из тела желудка. Взятый биопсийный образец опускается в стерильную сухую пробирку (эппендорф) и немедленно доставляется в лабораторию. Для более длительного хранения возможна заморозка взятиго биопсийного материала при температуре -20 0 С.

Особенности взятия биоптатов десен, мазков из зубодесневого кармана и слюны

Биопсийный материал из десен, мазки из зубодесневого кармана и слюна берутся у пациентов с гастродуоденальной патологией в анамнезе при наличии у них гингивитов и парадонтоза.

Взятый биопсийный образец опускается в стерильную сухую пробирку (эппендорф) и немедленно доставляется в лабораторию. Для более длительного хранения возможна заморозка взятиго биопсийного материала при температуре -20 0 С.

Мазки из зубодесневого кармана собираются в стерильную пробирку (эппендорф) с физиологическим раствором. В этом случае пробирки могут храниться в холодильнике (+4 0 С- +6 0 С) не более 12 часов, а их транспортировка осуществляется в сумке-холодильнике.

ВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ

Herpes Simplex virus II; Citomegalovirus; H. papiloma virus 16, 18

Исследуемый материал- мазки

При герпетической инфекции соскобы лучше всего брать с генитальных поражений (везикул, язвочек). При отсутствии генитальных поражений соскоб берется из цервикального канала. При диагностике цитомегаловирусной инфекции материалом для исследования могут быть, мазок из задней стенки глотки, соскобы из влагалища, уретры и цервикального канала, слюна, спиномозговая жидкость. При диагностике папилломавирусной инфекции материалом для исследования могут быть мазок из носоглотки, с конъюктивы глаза, соскоб из цервикального канала, шейки матки, т.е. слизистых (неороговевабщий эпителий).

Взятие биологического материала Взятие биологического материала повозможности должно проводиться в период обострения инфекции. См. урогенитальный хламидиоз, урогенитальный микоплазмоз.

Herpes Simplex virus I; Herpes Simplex virus II; Herpes Simplex virus VI
Citomegalovirus; Epstein Barr virus

Исследуемый материал Нативная кровь.

Подготовка пациента, взятие биологического материала и условия его транспортировки Кровь на исследование желательно брать натощак.

Венозная кровь в количестве 1-1,5 мл отбирается в стерильную пробирку (эппендорф) объемом 1,5 мл с раствором ЭДТА. Пробирка с кровью может храниться в холодильнике (+4 0 С- +6 0 С) не более 24 часов. Пробирку не замораживать. Исследование будет проводиться из плазмы и форменных элементов крови.

HBV-ДНК; Определение концентрации HBV-ДНК методом конкурентной ПЦР
HCV-РНК (полуколич. оценка) + anti-HCV; HCV-РНК с определением генотипа HCV+ anti-HCV; Hepatitis G; TTV-ДНК

Исследуемый материал Сыворотка крови.

Подготовка пациента, взятие биологического материала и условия его транспортировки Взятие венозной крови и приготовление сыворотки см. в разделе определение концентрации гомонов методом ИФА. Исследованию подлежит cыворотка, не содержащая примеси эритроцитов. В случае необходимости длительного хранения исследуемого образца крови (только для гепатитов B, C, G) необходимо отобрать 1 мл сыворотки или плазмы крови и хранить ее при температуре -20 0 С не более 2-х недель.

КОМПЛЕКСНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ НА БАКТЕРИАЛЬНЫЙ ВАГИНОЗ

Исследуемый материал Мазки из заднего нижнего свода влагалища.

Для комплексной диагностики бактериального вагиноза необходимо:
Взять соскоб эпителиальных клеток из заднего или бокового свода влагалища на отдельное одноразоаое предметное стекло, подписать и высушить его. Хранить стекло при комнатной температуре.
Удалить слизь и взять соскоб эпителиальных клеток из заднего или бокового свода влагалища одноразовым зондомщеткой типа цервикс-браш в ПЦР-пробирку с реактивом “ДНК-ЭКСПРЕСС”. Хранить пробирку в морозильной камере при температуре минус 20оС до 10 дней.
Предметное стекло и ПЦР-пробирку отправить в лабораторию “Литех” с полностью заполненным направлением.

Взятие биологического материала и условия его транспортировки

См. особенности взятия материала из влагалища для цитологического и ПЦР исследований.

Кафедра клинической лабораторной диагностики с курсом ФПК и ПК

Перечень разделов по дисциплине клиническая лабораторная диагностика для подготовки к выполнению аудиторных контрольных работ в зимнюю лабораторно-экзаменационную сессию студентами 6 курса заочной формы обучения.

1. Организационная структура клинико-диагностической лаборатории.

2. Общеклинические лабораторные исследования.

3. Гематологические лабораторные исследования.

4. Лабораторные методы оценки гемостаза.

5. Биохимические лабораторные исследования.

6. Контроль качества лабораторных исследований.

Перечень контрольных вопросов по дисциплине клиническая лабораторная диагностика для подготовки к выполнению аудиторных контрольных работ в зимнюю лабораторно-экзаменационную сессию студентами 6 курса заочной формы обучения.

    Структурная организация клинико-диагностической лаборатории.

    Нормативные документы и приказы МЗ РБ, регламентирующие работу клинико-диагностической лаборатории.

    Оборудование клинико-диагностической лаборатории.

    Основная измерительная и аналитическая аппаратура клинико-диагностической лаборатории.

    Основы техники безопасности и правила санэпидрежима при работе в клинико-диагностической лаборатории.

    Правила взятия, доставки, приема, оформления и регистрации биологического материала.

    Общеклинические лабораторные исследования.

    Подготовка пациента к исследованию, сбор, хранение и обработка материала для общего анализа мочи.

    Физические свойства мочи: цвет, прозрачность, запах, рН, относительная плотность мочи.

    Химические свойства мочи, методы определения общего белка (качественный и количественный методы, методы «сухой химии»).

    Определение глюкозы в моче при помощи индикаторной бумаги и глюкозооксидазным методом.

    Правила приготовления нативного препарата мочевого осадка.

    Количественное определение элементов организованного осадка мочи.

    Определение элементов неорганизованного осадка.

    Виды неорганизованных осадков.

    Общий клинический анализ крови.

    Характеристика методов определения СОЭ, концентрации гемоглобина, подсчета количества эритроцитов, цветового показателя, лейкоцитов и лейкоцитарной формулы.

    Правила подготовки пациента, забор, хранение и обработка материала для общего клинического анализа крови.

    Нормальные значения и пределы физиологических колебаний уровня эритроцитов и лейкоцитов периферической крови.

    Правила приготовления препарата и подсчета в камере Горяева.

    Метод определения гемоглобина крови гемоглобинцианидным методом.

    Современное представление о костно-мозговом кроветворении.

    Процентное содержание лейкоцитов в периферической крови. Диагностическое значение лейкоцитарной формулы.

    Лабораторные исследования, характеризующие свертывающую систему крови.

    Понятие о системе свертывания крови.

    Первичный гемостаз. Лабораторные методы исследования первичного гемостаза.

    Фазы коагуляционного гемостаза.

    Фибринолиз.

    Антикоагулянтная система.

    Лабораторные методы оценки вторичного гемостаза.

    Лабораторные исследования, характеризующие биохимические показатели крови.

    Лабораторные показатели, характеризующие белковый обмен. Определение общего белка в сыворотке крови биуретовым методом.

    Остаточный азот и его компоненты. Методы определения мочевины, креатинина, мочевой кислоты.

    Методы исследования ферментов. Клинико-диагностическое значение определения активности ферментов.

    Биологическая роль углеводов. Определение содержания глюкозы ферментативным методом.

    Липопротеины плазмы крови. Лабораторные показатели липидного обмена.

    Образование и метаболизм желчных пигментов. Клинико-диагностическое значение исследования показателей пигментного обмена.

    Аналитическая надежность и контроль качества клинических лабораторных исследований.

    Аналитическая оценка лабораторных результатов. Виды ошибок, их характеристика.

    Внутрилабораторный контроль качества. Методы контроля воспроизводимости результатов исследования. Контроль правильности результатов исследования.

C оставление аналитического лабораторного заключения.

Аналитическое лабораторное заключение составляется по условиям ситуационной задачи.

На основании их анализа предложенных лабораторных данных необходимо ответить на следующие вопросы:

Принцип, лежащий в основе анализируемого метода;

Необходимое оборудование;

Правила подготовки исследуемого материала и основные источники ошибок возможных при выполнении данного метода;

Единицы измерения;

Понятие о референтных значениях. Клинико-диагностическое значение анализируемого метода.

Практические навыки:

Организация рабочего места для выполнения лабораторных исследований;

Приготовление реагентов в необходимой концентрации;

Прием, маркировка и хранение биологического материала;

Выполнение общего анализа крови;

Выполнение общего анализа мочи;

Выполнение гемостазиологического исследования;

Выполнение биохимических исследований;

Оформение результатов лабораторных исследований;